關於(yu)細(xi)胞融(rong)合技術的介紹
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細(xi)胞融(rong)合儀,也叫電融(rong)合儀。比較適合(he)用(yong)在細(xi)胞雜交(jiao)、細(xi)胞融(rong)合、可在倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)直接觀(guan)察(cha),可以用在(zai)微生(sheng)物(wu)學(xue)、動物醫(yi)學(xue)、生(sheng)物工程(cheng)等(deng)方(fang)面(mian)的(de)研究(jiu)。與(yu)普通(tong)的(de)化學(xue)融(rong)合方(fang)法(fa)比起來(lai),它使(shi)用的時候(hou)對(dui)細(xi)胞沒(mei)有毒性(xing)、有較高(gao)的融(rong)合(he)效(xiao)率、更加(jia)的方(fang)便(bian)快(kuai)速等(deng)特(te)點(dian)都是比較明(ming)顯(xian)的(de)。
細(xi)胞融(rong)合(cellfusion)或細(xi)胞雜交(jiao)(cellhybridization)是指真(zhen)核(he)細(xi)胞通(tong)過(guo)介導(dao)和(he)培(pei)養(yang),兩(liang)個或多個細(xi)胞合(he)並成壹(yi)個雙(shuang)核(he)或多核(he)細(xi)胞的(de)過(guo)程。人(ren)工(gong)的(de)細(xi)胞融(rong)合開始於(yu)20世紀(ji)50年(nian)代,60年(nian)代到(dao)70代作為壹(yi)門(men)新(xin)興的技術(shu),發(fa)展非常(chang)快(kuai),應用(yong)範圍也極為廣泛(fan),除了(le)同種類細(xi)胞間(jian)可(ke)以融合(he),種間(jian)遠(yuan)緣細(xi)胞也能(neng)融合(he),細(xi)胞與(yu)組(zu)織(zhi)不同,不排(pai)斥(chi)異類(lei)、異種(zhong)細(xi)胞,動物細(xi)胞如(ru)此(ci),植(zhi)物細(xi)胞也是如(ru)此(ci)。基因型相(xiang)同的細(xi)胞融(rong)合成的(de)雜交(jiao)細(xi)胞稱為同核體(ti)(homokaryon);來(lai)自不同基因型的(de)雜交(jiao)細(xi)胞則(ze)稱為異核(he)體(ti)(heterokaryon)。
細(xi)胞融(rong)合的原理(li):
首先,通(tong)過(guo)雙向(xiang)電(dian)泳使(shi)細(xi)胞間(jian)的(de)接觸(chu)變(bian)得非常(chang)緊(jin)急(ji)。普通(tong)電(dian)泳采用(yong)直流電來(lai)移(yi)動分子(zi),雙(shuang)向電泳則與(yu)之(zhi)不同,采用(yong)了(le)高(gao)頻交(jiao)流(liu)電(dian)。在活細(xi)胞等(deng)微(wei)粒(li)的內(nei)部(bu),誘導(dao)去(qu)極化,引起細(xi)胞聚(ju)集,排(pai)列成串珠狀,互(hu)相(xiang)緊(jin)密接觸(chu)。
然(ran)後(hou)給予短(duan)暫的(de)高(gao)壓脈沖(chong),引起(qi)細(xi)胞膜(mo)的穿(chuan)透,隨後細(xi)胞膜(mo)發(fa)生結合(he)導(dao)致細(xi)胞融(rong)合。為了(le)穩定(ding)這個過(guo)程,在(zai)短(duan)期(qi)內(nei)需要(yao)施(shi)加交流電(dian)壓。
剛(gang)完(wan)成的(de)電融(rong)合(he)的(de)融合細(xi)胞可(ke)稱為異核(he)體(ti),因為盡管表(biao)面(mian)的細(xi)胞膜(mo)已經發(fa)生了(le)融(rong)合(he),細(xi)胞內(nei)仍可以看到(dao)兩個或兩(liang)個以上的(de)細(xi)胞核(he)。隨後,細(xi)胞核(he)也會(hui)細(xi)胞內(nei)部(bu)發(fa)生融合。在(zai)多數情況下(xia),該(gai)過(guo)程會(hui)導(dao)致核(he)中的(de)染色(se)體(ti)數量急劇(ju)下降。